實驗流程:
1.準備細胞、藥物后，檢測藥物IC50(72h)，待IC50(SPSS軟件統(tǒng)計)結(jié)果
出來后，與客戶匯報進展，推進項目(預計時間2-3周);
2.采用藥物共培養(yǎng)的方式構建耐藥株，具體為:調(diào)整細胞密度60%左右，藥物濃
度為IC5、IC10、IC20、IC30，含藥培養(yǎng)48-72h后撤藥(采用6孔板實驗，具體
時間已顯微鏡觀察為準(細胞死亡不超過20%)，拍照記錄)，換入正常培養(yǎng)基，
觀察細胞狀態(tài)，
3.在加藥共培養(yǎng)的過程中，觀察細胞每次加藥培養(yǎng)后的狀態(tài)和恢復速度，如果細
胞在撤藥后，恢復時間較長(超過7天)，狀態(tài)較差，則說明該細胞不適合構建耐
藥株，成功概率較低，建議終止實驗;(預計總時間2月內(nèi))
4.待細胞生長恢復后，凍存一支，重復步驟2(依據(jù)細胞情況，可適當提高藥物
濃度)，進行5~8輪培養(yǎng)后，即可構建出有一定耐藥性的細胞
5.細胞構建完成后，給客戶提供一株親本株和一株耐藥株，提交的結(jié)果是親本株
和耐藥株的IC50結(jié)果，耐藥倍數(shù)(大于5倍)和實驗報告;(預計總時間8-10月)